NCBI Primer-BLAST
经典免费在线工具，2025 年仍保持每月一次的小版本更新，基因库最全。缺点是排队时间从 30 s 延长到 3–10 min，高峰时段更慢
无中文界面，离线不可用。
2025 年场景化结论：临时设计几条 qPCR 引物、且不赶时间时首选。
Primer3Plus
开源算法“老大哥”，参数细到令人发指，能玩出花，但学习曲线陡。2025 年起官方镜像开始支持 REST API，方便脚本批量调用。
2025 年场景化结论：生信团队需要脚本化、定制化搜索时用它最灵活。
Primer Premier 6（Premier Biosoft）
桌面老牌，功能覆盖 PCR、qPCR、巢式、SNP、简并、多重等几乎所有场景。2025 年售价依旧坚挺（单席位永久 ¥6 k）。英文界面，无本地化 Blast。
2025 年场景化结论：经费充足、追求“一把梭”全功能且不介意英文环境的课题组可一次买断。
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Oligo 7
业内公认的“评估权威”，热力学模型最精细，可一键出图给评审看。但搜索功能弱，常与 Premier 搭配：Premier 搜、Oligo 评。
2025 年新版仍只有英文，无网络 Blast。
2025 年场景化结论：发高水平文章需要做严谨引物热力学评估时，用它做二次校验。
可视化克隆“王者”。引物设计只是其附带功能，拖拽式操作极友好，但缺本地 Blast、缺中文。2025 年订阅价 ¥4 500/年。
2025 年场景化结论：主要做质粒构建、偶尔顺带设计引物的实验室值得入手，纯引物需求则性价比低。
Benchling（云端）
2025 年已升级到“三通道 AI 优化”——实时抓取 PubMed 最新文献数据辅助设计。协作、审计功能强大，但数据需上传境外云。教育价 ¥2 500/人/年。
2025 年场景化结论：跨国团队、IT 允许上云的初创公司，用它可同时做项目管理和引物设计。
Beacon Designer 8
专攻 TaqMan、分子信标、FRET 探针，算法来自 Premier 公司，探针 Tm 可精确到小数点后一位。2025 年售价 ¥8 k/永久，仍无中文。
2025 年场景化结论：做多重荧光探针、数字 PCR 的实验室，省调试时间就是省钱。
引物设计大师（PrimerDesignPro）
国产桌面软件，2025 年 8 月最新版 V3.2。中文界面、本地 Blast 3–6 s 完成、支持 GLP 审计追踪，可批量跑 10 000 条序列。教育/医院价 ¥3 k/席位/年。
2025 年场景化结论：企业、医院、合规实验室大批量设计且需要审计报告时，直接上车最省心。
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